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常用的液體深層培養(yǎng)法

1.放大法 將微生物在搖瓶基礎(chǔ)上逐級放大實現(xiàn)大量生產(chǎn)。在厭氧培養(yǎng)時問題歸結(jié)為如何從大型種子罐或發(fā)酵罐中除去發(fā)酵熱。為此應(yīng)利用發(fā)酵時生成的二氧化碳所引起的液體流動和輔助攪拌,以提高冷卻效率。此時僅進(jìn)行種子罐或發(fā)酵罐傳熱面積的設(shè)計計算即可。但是,在好氧培養(yǎng)中,大多以氧的供給為基準(zhǔn)進(jìn)行放大。一般從實驗室規(guī)模到工廠生產(chǎn)要經(jīng)過3-5級放大步驟。放大過程中應(yīng)考慮:①氧傳遞速度相等。②比較攪拌槳葉頂端速度。③比較單位液體量所需的攪拌動力④混合時間相同。⑤雷諾準(zhǔn)數(shù)相同。⑥通過反饋控制盡量能使重要環(huán)境因子一致。 2.兩步法 在酶制劑和氨基酸生產(chǎn)方面應(yīng)用較多。酶制劑的兩步法液體深層培養(yǎng)每一步菌體相同而培養(yǎng)條件不同,因為微生物生長與產(chǎn)酶的最適條件有很大差異。例如往培養(yǎng)基中添加葡萄糖能大大增加菌體或菌絲的生長,然而卻嚴(yán)重阻礙許多種酶的合成。加強(qiáng)培養(yǎng)液的通氣雖然能促進(jìn)微生物生長,可是在多數(shù)場合下反而抑制酶的合成。為了取得最大的活性酶,必須研究出一種調(diào)節(jié)方法,既要求細(xì)胞的單位酶活性高,又要求細(xì)胞的數(shù)量多,也就是說,給予菌體在各種生理時期創(chuàng)造不同的條件兩步法液體深層培養(yǎng)就是實現(xiàn)這種調(diào)節(jié)方法的具體措施之一,酶制劑生產(chǎn)兩步法的特點是將菌體生長條件(營養(yǎng)期)與產(chǎn)酶條件(自我繁殖期)區(qū)分開來。菌種先在豐富的培養(yǎng)基上大量繁殖,然后收集菌體濃縮物,洗滌后再轉(zhuǎn)入添加誘導(dǎo)物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基,在此期間,菌體積累大量的酶,一般不再繁殖,營養(yǎng)成分或誘導(dǎo)物得到充分利用。 3.控制培養(yǎng)法 了解發(fā)酵罐內(nèi)部的變化情況,掌握短暫時間內(nèi)狀戀變量的變化以及可能測定的環(huán)境因子,對微生物代謝活動的影響,并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行控制培養(yǎng),以達(dá)到產(chǎn)物生成的最優(yōu)培養(yǎng)條件。為此,用來測定狀態(tài)變最的傳感器取得數(shù)據(jù),經(jīng)電子計算機(jī)進(jìn)行綜合分析,再將其結(jié)果作為反饋調(diào)節(jié)的信號,將環(huán)境(培養(yǎng)條件)控制于給定的基準(zhǔn)內(nèi)。這就叫做電子計算機(jī)控制發(fā)酵。 4.分批培養(yǎng)法(間歇發(fā)酵法) 分批培養(yǎng)法,也叫間歇發(fā)酵法。先將空罐殺菌,培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐,接種之后進(jìn)行培養(yǎng),柱培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基成分減少,微生物增殖。微生物周圍的環(huán)境隨時間而變化是一種非穩(wěn)態(tài)操作法,此法不易染菌,但很難采用控制基質(zhì)等濃度的方法來增大發(fā)酵生產(chǎn)能力。目前多在酒精、氨基酸、抗生素生產(chǎn)中應(yīng)用。 5.連續(xù)培養(yǎng)法(連續(xù)發(fā)酵法) 連續(xù)培養(yǎng)法,也叫連續(xù)發(fā)酵法。在往發(fā)酵罐中連續(xù)供給新鮮培養(yǎng)基的同時,將含有微生物和產(chǎn)物的培養(yǎng)液,從發(fā)酵罐中連續(xù)放出,這叫連續(xù)培養(yǎng)法。其特點是能使微生物處于恒定不變的環(huán)境中進(jìn)行長期持續(xù)的培養(yǎng),該系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)被叫做恒化器。同時包含了流入和流出,屬開放系統(tǒng),故變異菌株和雜菌污染隨時間的延長而增大。從技術(shù)上也很難保證流入和流出速度一致。連續(xù)培養(yǎng)用于廢水處理,葡萄糖酸發(fā)酵,酒精發(fā)酵等工業(yè)中。 6.補(bǔ)料分批培養(yǎng)法(流加法) 補(bǔ)料分批培養(yǎng)法,也叫流加發(fā)酵法。在分批培養(yǎng)時,不斷地供給培養(yǎng)基,但所需產(chǎn)物不到某一定時刻不放出的方法,稱為補(bǔ)料分批堵養(yǎng)法。它用于面包酵母、氨基酸、抗生索等工業(yè)生產(chǎn)。 本文參考《發(fā)酵微生物學(xué)》一書。
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